间充质干组织（MSCs）的职能衍生物物小组织外囊泡（sEV）在复苏中医药学中受到了了前所未有的关心和操作。可是，sEV大经营规模提取的技术性禁止极其异构类别曾加了其操作的冗杂性。当下尚不清除异质性sEVs要不要是指MSCs职能的各不相同等方面。

2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱生物制品为该研究提供了血清组学拜谱生物。

英语怎么说版头：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography

发过期刊杂志：Journal of Extracellular Vesicles

干扰指数：15.5

发表论文期限：2024.12.7

小说拜谱生物公司：南京医科大学

组学技术应用：miRNA测序、血清组学（拜谱生态学提供了）

实验产品：外泌体

的研究路径：

一、探析没想到

01、依据将TFF与SEC平台相紧密联系来分离出来sEVs亚群和HucMSCs

为了能实现了适用临床实验选用的MSC-sEVs的大投资规模制作，编辑按照好几个种将TFF与SEC相紧密联系的技巧，从HucMSCs的状态塑造基中离和纯化sEVs。经过蛋白酶质痕印、NTA进行分析、纳流细胞核术的结论表述剥离 的三个峰也许代替了sEVs的三个不同的亚群。编辑将使用于这三个最高值的sEVs亚群对应名称为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。

图1：TFF切合SEC操作系统从HucMSCs中分刘海离和定量分析sEVs亚群

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

02、MSC-sEVs亚群的定量分析

sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用核蛋白组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。

图2：两个人sEVs亚群的蛋清质组学探讨

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。

图3：俩个sEVs亚群的miRNA谱

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

03、S1-sEVs和S2-sEVs对上皮肿瘤细胞繁殖和巨噬上皮肿瘤细胞极化的区别调空

设计背景两人sEVs亚群的不一随带物主成，设计进一点分用这几种不一服用量的S1-sEVs或S2-sEVs提升3T3人体细胞膜核膜及及用脂多糖（LPS）进行处理小鼠骨髓因素的巨噬人体细胞膜核膜（BMDMs）。后果察觉到S1-sEVs和S2-sEVs对人体细胞膜核膜出现和分裂主义速率单位情况出不一的危害，另外对巨噬人体细胞膜核膜极化的技能有着区别（图4a-p）。

图4：S1-sEVs和S2-sEVs对人体细胞核分裂繁殖和巨噬人体细胞核极化的差别宏观调控

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles,2024）

04、S1-sEVs和S2-sEVs之后肢脑供血不足中的差异性调高

MSC简答双重性的sEVs根据有助于新微心动脉的进行之后肢动脉痉挛性根治中被丰富了解，为了能了解S1-sEVs和S2-sEVs对微心动脉绘制二维码和动脉痉挛性团队重复的印象，根据一侧股大动脉结扎树立了小鼠后肢动脉痉挛性模形。最后说明与S1-sEVs优于，S2-sEVs的表现出有远见的促微心动脉绘制二维码的特点，引致动脉痉挛性引诱拉伤后后肢便捷充分修复系统和重复（图5a-o）。

图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢缺血性的差异缓解成果

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

05、S1-sEVs和S2-sEVs在皮伤口康复康复中的意义

MSC下列不属于ip产业的sEV因为其在开刀手术、创伤外科、烧伤或尿毒症疾病症状出现的造成 特效创口康复的修复的修复中的使用而被比较广泛科研。为了能够了解分离出来的sEVs亚群对造成 特效创口康复的修复的修复的的引响，本科研创建好几回个拥有深部2度烧伤的大鼠模型工具。結果表示S2-sEVs根据对糖酵解的积极态度的引响对造成 特效创口康复的修复的修复的表现出极为很有益的的引响（图6a-p）。

图6：S1-sEVs和S2-sEVs对面部皮肤患处伤口修复的不同的关系

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS诱发的直肠炎的各种不同治疗方法效用

写作者找到S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬体细胞导电性的之间的关系调结后面，坚持在小鼠乙状直肠炎模式中风险评估这句话的免疫抗体调结功用。导致阐释了S1-sEVs治疗方法DSS诱惑的乙状直肠炎的非特异聊天（图7a-s）。

图7：S1-sEVs和S2-sEVs对脸部皮肤伤口长好长好的各种不同后果

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

07、sEVs二个亚群中生态学会出现的差异性改善

ESCRT根据性经过和非ESCRT性经过都具体指导sEV的生物学制品时有发生。在这种研究探讨中，小说作家出现 了sEVs标制物在S1-sEVs和S2-sEVs中的差别把你想表达出来。EGFR是精品内吞经过中已共建的HGS底物，虽然在S1-sEVs和S2-sEVs中所应该洞察分析到EGF血清，但在S1-sEVs中EGFR泛素化水平面要高得多，HGS在将泛素化货件指导到S1-sEVs中起关键的的作用，进行共建HGS敲除细胞核系出现 HGS的低下引发S1-sEVs的生物学制品时有发生显得增多，但对S2-sEVs的会产生基本上还没有后果，认为S1-sEVs和S2-sEVs进行不一样的控制规则分泌量，分离又称ESCRT根据性和ESCRT非根据性经过（图8a-t）。

图8：sEVs的好几个亚群之間怪物发生的差别调准

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

二、稿件个人心得体会

本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用蛋白质组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。

图9：sEVs亚群的菌物分解成依懒于不一的组织细胞内经过

（图源：Li J., et al., Journal of Extracellular Vesicles, 2024）

三、拜谱总结ppt

该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了蛋白酶组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！

参看文章：

LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183